Plásmido Doble Nickase (h) Tom20: sc-400041-NIC

TOMM20 codifica Tom20, un receptor central del complejo translocasa de la membrana mitocondrial externa (TOM), que reconoce secuencias de direccionamiento mitocondrial en el extremo N e inicia la importación a la mitocondria de proteínas codificadas en el núcleo. Al coordinarse con otros componentes de TOM y con las translocasas TIM situadas aguas abajo, Tom20 contribuye a la biogénesis mitocondrial, al ensamblaje de la cadena respiratoria y a la proteostasis, procesos que influyen en la fosforilación oxidativa, la homeostasis redox y la señalización de la apoptosis. La alteración de la importación de proteínas mitocondriales puede promover estrés bioenergético, cambios en la dinámica mitocondrial y activación de la inmunidad innata, asociados a neurodegeneración, disfunción cardiometabólica y remodelación metabólica relacionada con tumores. Por ello, TOMM20 es un nodo útil para estudiar las vías de control de calidad mitocondrial y las redes de señalización sensibles al estrés.

Tom20 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TOMM20 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TOMM20. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TOMM20. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TOMM20 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.