Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (m) Tom1: sc-423467-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Tom1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Tom1 (m) y el plásmido de doble nickasa Tom1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Tom1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Tom1 Anticuerpo (H-5): sc-514430
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Tom1 | sc-423467-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Tom1 | sc-423467-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Tom1 de ratón (diana de Myb1) codifica una proteína adaptadora endosomal que se une a la ubiquitina y recluta maquinaria asociada a ESCRT para regular el tráfico y la clasificación de proteínas de membrana ubiquitinadas. Mediante interacciones con la clatrina y componentes endosomales, TOM1 contribuye a la maduración de los endosomas, la degradación de la carga y el control del recambio de receptores, influyendo así en la amplitud y la duración de la señalización. TOM1 también se ha relacionado con la modulación de vías de señalización inflamatoria, incluida la regulación del eje IL-1/TLR a través del tráfico de complejos de señalización. El transporte endolisosomal desregulado y la señalización de la inmunidad innata son relevantes para mecanismos de enfermedades neurodegenerativas y mediadas por el sistema inmunitario, lo que convierte a Tom1 en un locus útil para el análisis de vías en modelos celulares.
Tom1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tom1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tom1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tom1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tom1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.