TMPRSS2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402828-ACT

TMPRSS2 (transmembrane serine protease 2) kodiert eine Serinprotease vom Typ II mit Transmembran-Domäne, die vor allem im Prostata- und Atemwegsepithel exprimiert wird, wo sie zur perizellulären Proteolyse und zur Aufrechterhaltung der epithelialen Homöostase beiträgt. Die Transkription wird durch Androgenrezeptor-Signalgebung reguliert, wodurch die TMPRSS2-Expression mit hormonresponsiven Gen-Netzwerken und Programmen der epithelialen Differenzierung verknüpft ist. TMPRSS2 wird umfassend hinsichtlich seiner Rolle bei der proteasevermittelten Verarbeitung von Zelloberflächen- und sezernierten Substraten sowie der Modulation von Signalwegen untersucht, die an Gewebeumbau und Entzündungsreaktionen beteiligt sind. Eine fehlregulierte TMPRSS2-Expression und TMPRSS2-assoziierte Genfusionen sind für die Biologie des Prostatakarzinoms relevant, und eine TMPRSS2-abhängige proteolytische Aktivität wird in respiratorischen Forschungsmodellen mit Wirt–Erreger-Interaktionen in Verbindung gebracht.

TMPRSS2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TMPRSS2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TMPRSS2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TMPRSS2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TMPRSS2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TMPRSS2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TMPRSS2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TMPRSS2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TMPRSS2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TMPRSS2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.