Partículas Lentivirales de Activación (h) TMEM5: sc-411455-LAC

TMEM5 codifica una glicosiltransferasa transmembrana residente en el aparato de Golgi, necesaria para la modificación postraduccional de la α‑distroglicana, un receptor clave que conecta la matriz extracelular con el citoesqueleto. Al contribuir al ensamblaje de glicanos O‑manosilados funcionales, TMEM5 ayuda a regular la adhesión célula–matriz, las interacciones con la membrana basal y los procesos de señalización que sostienen la arquitectura tisular. La alteración de esta vía de glicosilación compromete la unión de ligandos de la α‑distroglicana y se asocia con fenotipos de distroglicanopatía, lo que destaca a TMEM5 como un nodo importante en la biología neuromuscular y del desarrollo dependiente de la glicosilación. En consecuencia, TMEM5 se estudia con frecuencia en el contexto de la glicobiología, el tráfico del Golgi y la organización de la matriz extracelular.

Las partículas de activación lentiviral TMEM5 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TMEM5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TMEM5 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TMEM5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TMEM5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TMEM5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.