Partículas Lentivirales de Activación (h) TMEM45A: sc-412437-LAC

TMEM45A codifica la proteína transmembrana 45A, una proteína multipaso de membrana poco caracterizada, enriquecida en epitelios hipóxicos y queratinizantes, y vinculada a la adaptación celular al estrés por baja disponibilidad de oxígeno. Las funciones descritas conectan TMEM45A con el tráfico de membranas y la organización de la vía secretora, con efectos posteriores sobre programas de diferenciación epitelial y redes transcripcionales sensibles al estrés. La expresión alterada de TMEM45A se ha asociado con cambios en la supervivencia celular y fenotipos invasivos en modelos tumorales, lo que respalda su relevancia en la señalización impulsada por hipoxia y la plasticidad epitelial. Estas propiedades convierten a TMEM45A en un objetivo útil para estudiar respuestas al estrés del microambiente, la biología de tejidos de barrera y mecanismos de regulación génica en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TMEM45A (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TMEM45A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TMEM45A (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TMEM45A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TMEM45A. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TMEM45A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.