TMEM192 Double Nickaseプラスミド (h): sc-415021-NIC

TMEM192は、リソソーム膜に豊富に局在するマルチパス型膜貫通タンパク質をコードしており、リソソームのアイデンティティの維持、膜構造の組織化、ならびにタンパク質分解恒常性に関与すると考えられています。リソソームの輸送やターンオーバーに影響を与えることで、TMEM192はエンドリソソーム成熟、オートファジー‐リソソーム機能、細胞ストレス応答を制御する経路と交差します。リソソーム動態の破綻は神経変性、感染生物学、がん細胞代謝などと広く関連するため、TMEM192はリソソーム依存的プロセスが細胞生理をどのように形作るかを探るうえで有用な標的となります。ヒト細胞モデルでは、TMEM192の改変（攪乱）により、リソソーム膜組成と下流の異化シグナル伝達ネットワークとの関連の解明に役立ちます。

TMEM192 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TMEM192 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TMEM192内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TMEM192の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TMEM192が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。