TMEM135 Double Nickase Plasmid (h): sc-407333-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TMEM135 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TMEM135 Double-Nickase-Plasmid (h) und TMEM135 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TMEM135 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TMEM135 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407333-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TMEM135 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407333-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TMEM135 kodiert ein konserviertes, multipassiges Membranprotein, das an der Homöostase von Mitochondrien und Peroxisomen beteiligt ist und dem Funktionen in der Organellendynamik, im Lipidhaushalt und in der zellulären Bioenergetik zugeschrieben werden. TMEM135 wurde mit Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht, die den Fettsäurestoffwechsel und die Reaktionen auf oxidativen Stress regulieren, und positioniert sich damit an der Schnittstelle zwischen metabolischer Anpassung und Qualitätskontrolle von Organellen. Eine Störung der TMEM135-Expression wurde mit veränderter mitochondrialer Morphologie und peroxisomenbezogenen Prozessen assoziiert, die häufig in metabolischen und neurodegenerativen Krankheitskontexten beeinträchtigt sind. Entsprechend wird TMEM135 in Signal- und Stoffwechselwegen untersucht, die Lipidoxidation, den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies sowie den Organellen-Crosstalk betreffen, der Zellüberleben und metabolischen Zustand beeinflusst.
TMEM135 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TMEM135-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TMEM135 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TMEM135-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TMEM135-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.