Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM132C (m): sc-431553

Présentation

Tmem132c code pour TMEM132C, une protéine transmembranaire multipasse prédite, localisée aux membranes cellulaires, et supposée contribuer à l’organisation de la surface cellulaire et à la signalisation associée à la membrane. Les membres de la famille TMEM132 ont été associés à la régulation de l’adhésion cellulaire et de la dynamique du cytosquelette, ce qui suggère des rôles dans l’architecture des tissus ainsi que dans l’homéostasie neuronale ou épithéliale. Dans les modèles murins, les profils d’expression de Tmem132c justifient l’étude de la manière dont les protéines membranaires modulent la connectivité cellulaire et les réponses au stress au cours du développement et dans la physiologie adulte. La dérégulation des modules transmembranaires d’adhésion et/ou de signalisation est fréquemment étudiée en neurobiologie et en génétique des maladies complexes, ce qui fait de TMEM132C une cible utile pour l’analyse mécanistique des voies biologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM132C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tmem132c dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tmem132c, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tmem132c à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM132C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tmem132c pour l'étude de la signalisation de TMEM132C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tmem132c essentiels à la fonction de TMEM132C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tmem132c pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM132C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TMEM132C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tmem132c. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM132C plasmide HDR (m) et le TMEM132C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tmem132c pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tmem132c définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.