Particules Lentivirales d'Activation (h) TMEM125: sc-414318-LAC

TMEM125 code une protéine transmembranaire multipasse dont l’annotation fonctionnelle reste limitée, décrite comme se localisant aux membranes intracellulaires et impliquée dans la régulation du trafic vésiculaire et de la signalisation associée aux membranes. En tant qu’organisateur membranaire putatif, TMEM125 est étudiée dans le contexte de l’homéostasie des organites, du tri des protéines et des réponses au stress cellulaire qui influencent la prolifération et la survie. Les variations d’expression de régulateurs transmembranaires tels que TMEM125 sont fréquemment explorées dans des jeux de données transcriptomiques afin d’identifier des associations avec des voies oncogéniques, la signalisation immunitaire et l’adaptation métabolique. Ces caractéristiques font de TMEM125 une cible utile pour des études mécanistiques reliant la dynamique des membranes à la modulation des voies de signalisation et à des phénotypes pertinents pour la maladie dans des cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM125 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TMEM125 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM125 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TMEM125, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TMEM125. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TMEM125 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.