TMC8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406378

Übersicht

TMC8 (transmembrane channel-like 8; auch als EVER2 bekannt) kodiert ein multipass-Membranprotein, das an der Regulation der Signalübertragung in Keratinozyten und Immunzellen beteiligt ist. Berichtet wird unter anderem eine Rolle bei der Kontrolle der intrazellulären Zinkhomöostase und nachgeschalteter transkriptioneller Antworten. TMC8 wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die die antivirale Abwehr, die epidermale Differenzierung und entzündliche Signalgebung beeinflussen, einschließlich einer Modulation von NF-κB-assoziierten Reaktionen in bestimmten Kontexten. Genetische Veränderungen von TMC8 sind mit einer erhöhten Anfälligkeit für Epidermodysplasia verruciformis und einer veränderten Wirtskontrolle kutaner Infektionen mit humanen Papillomaviren assoziiert, was seine Relevanz für die Biologie der Hautbarriere und für Studien zu Virus–Wirt-Interaktionen unterstreicht. Als membranassoziierter Faktor wird TMC8 häufig daraufhin untersucht, wie ionenabhängige Signalübertragung mit der epithelialen Immunität und der Persistenz viraler Infektionen zusammenwirkt.

Das TMC8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TMC8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TMC8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TMC8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TMC8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TMC8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TMC8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TMC8-Exone abzielen, die für die TMC8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TMC8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TMC8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TMC8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TMC8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TMC8 HDR-Plasmid (h) und TMC8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TMC8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TMC8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.