TLX3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405569-ACT

TLX3 (T-cell leukemia homeobox 3) ist ein Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der Entwicklung und der Festlegung von Zelllinien kontextabhängige Genexpressionsprogramme reguliert und eine wichtige Rolle bei der hämatopoetischen und neuronalen Differenzierung spielt. Durch die Bindung spezifischer DNA-Motive über seine Homeodomäne kann TLX3 Transkriptionsnetzwerke neu verdrahten, die Zellschicksalsentscheidungen, die Kontrolle der Proliferation und den Reifungszustand beeinflussen. Eine fehlregulierte TLX3-Expression ist mit veränderten Differenzierungsprogrammen und aberranter transkriptioneller Signalgebung verbunden, wie sie in Modellen hämatologischer Malignome beobachtet wird, was TLX3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Biologie onkogener Transkriptionsfaktoren macht. In zellulären Systemen wird eine Perturbation von TLX3 häufig eingesetzt, um nachgeschaltete Zielgene, epigenetische Zustände und Pathway-Crosstalk zu kartieren, die entwicklungs- und krankheitsrelevante Phänotypen steuern.

TLX3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TLX3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TLX3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TLX3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TLX3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TLX3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TLX3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TLX3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TLX3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TLX3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.