Plasmide CRISPR d'Activation (h) TLR9: sc-400600-ACT

TLR9 code le récepteur Toll‑like 9, un récepteur endosomal de reconnaissance des motifs (PRR) qui détecte les motifs CpG non méthylés présents dans l’ADN microbien et mitochondrial afin d’initier la signalisation de l’immunité innée. Après liaison au ligand, TLR9 transmet son signal principalement via MYD88, activant des cascades dépendantes d’IRAK/TRAF6 qui convergent vers les programmes transcriptionnels de NF‑κB et des IRF, favorisant la production de cytokines inflammatoires et les réponses à l’interféron de type I. Cette voie module la maturation des cellules dendritiques, l’activation des lymphocytes B et la défense antimicrobienne, et son dérèglement a été impliqué dans l’inflammation chronique et l’activation immunitaire associée aux maladies auto-immunes. Le TLR9 humain est donc largement étudié dans le contexte de la détection des acides nucléiques, du trafic endosomal et des réseaux de dialogue entre PRR, pertinents pour l’homéostasie immunitaire.

TLR9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TLR9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TLR9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TLR9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TLR9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TLR9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TLR9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TLR9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TLR9 dans les cellules tumorales présentant une expression de TLR9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.