Thrombospondin 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401207-ACT

THBS2 kodiert Thrombospondin 2, ein sezerniertes matrizelluläres Glykoprotein, das die Organisation der extrazellulären Matrix, die Zell‑Matrix‑Adhäsion und den Gewebeumbau moduliert. Thrombospondin 2 beeinflusst die integrin‑ und CD36‑assoziierte Signalübertragung, reguliert die Aktivität von Matrixmetalloproteinasen und prägt angiogene sowie entzündliche Antworten innerhalb des stromalen Mikromilieus. Über diese Prozesse wird THBS2 häufig in Zusammenhängen wie Fibrose, Wundheilung und Tumor‑Stroma‑Interaktionen untersucht, in denen die Dynamik der extrazellulären Matrix Zellmigration und Überleben steuert. Eine veränderte THBS2‑Expression wurde mit aberrantem vaskulärem Remodeling und einer Dysregulation der extrazellulären Matrix in Verbindung gebracht, was für mehrere pathophysiologische Zustände relevant ist.

Thrombospondin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen THBS2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Thrombospondin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des THBS2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der THBS2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Thrombospondin 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native THBS2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Thrombospondin 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Thrombospondin 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem THBS2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.