THADA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405868

Übersicht

THADA („thyroid adenoma associated“) kodiert ein großes zytoplasmatisches Protein, das an der zellulären Energiehomöostase und an stressadaptiven Prozessen beteiligt ist; zudem wurden Zusammenhänge mit der Funktion des endoplasmatischen Retikulums und der Calciumregulation beschrieben. Genetische Studien bringen THADA mit einer erhöhten Anfälligkeit für Schilddrüsenneoplasien sowie mit endokrinbezogenen Merkmalen in Verbindung, und eine veränderte THADA-Aktivität wurde in verschiedenen Populationen mit metabolischen Phänotypen verknüpft. In Zellmodellen wird die Manipulation von THADA genutzt, um Signalwege zu untersuchen, die Nährstoffsensorik, Organellenphysiologie und die Kontrolle des Zellwachstums koppeln. Diese Eigenschaften machen THADA zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur stoffwechselassoziierten Signalgebung und zur kontextabhängigen Tumorbiologie.

Das THADA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des THADA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des THADA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von THADA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die THADA-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von THADA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der THADA-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf THADA-Exone abzielen, die für die THADA-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere THADA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom THADA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom THADA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des THADA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das THADA HDR-Plasmid (h) und THADA HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von THADA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten THADA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.