Particules Lentivirales d'Activation (h) TGIF2: sc-416231-LAC

TGIF2 (TG-interacting factor 2) code un régulateur transcriptionnel à homéoboîte de la classe TALE, qui agit principalement comme corépresseur transcriptionnel et comme modulateur dépendant du contexte de la signalisation dépendante des SMAD. En interagissant avec des composants des voies TGF-β/Activine et en recrutant des complexes de modification de la chromatine, TGIF2 contribue à façonner des programmes transcriptionnels contrôlant les décisions de destinée cellulaire, la différenciation et la prolifération. L’activité de TGIF2 est également liée à la régulation de l’organisation du développement et des transitions épithélio-mésenchymateuses via des réseaux de régulation génique qui intègrent la signalisation et l’état de la chromatine. Une expression dérégulée de TGIF2 ou un déséquilibre des voies associées ont été associés à des phénotypes développementaux aberrants et ont été étudiés dans des modèles de reprogrammation transcriptionnelle oncogénique et de progression tumorale.

Les particules d'activation lentivirales TGIF2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TGIF2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TGIF2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TGIF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TGIF2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TGIF2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.