Plasmide CRISPR d'Activation (h) TGIF: sc-401472-ACT

Le gène humain **TGIF1** code **TGIF**, un régulateur transcriptionnel à homeobox de type TALE qui module des programmes d’expression génique contrôlant les décisions de destinée cellulaire au cours du développement et dans l’homéostasie tissulaire. TGIF agit notamment comme **corépresseur** de la transcription **dépendante de TGF‑β/SMAD**, en façonnant les réponses de signalisation qui influencent la dynamique épithélio‑mésenchymateuse, la prolifération et la différenciation. Par ses interactions avec les SMAD et d’autres cofacteurs transcriptionnels, TGIF contribue à ajuster l’amplitude et la durée de la voie, reliant les signaux extracellulaires au contrôle des gènes cibles au niveau de la chromatine. Une activité ou une expression dérégulée de **TGIF1** a été associée à des états de signalisation TGF‑β altérés, impliqués dans des anomalies du développement et dans des reprogrammations transcriptionnelles pertinentes pour la maladie, notamment dans des contextes de recherche sur le cancer et la fibrose.

TGIF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TGIF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TGIF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TGIF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TGIF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TGIF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TGIF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TGIF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TGIF dans les cellules tumorales présentant une expression de TGIF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.