Plasmide Double Nickase (h) TGF beta Receptor 1/TGFBR1: sc-400153-NIC

TGFBR1 code le récepteur de type I du transforming growth factor bêta (ALK5), une sérine/thréonine kinase qui s’associe à TGFBR2 pour transmettre les ligands TGF-β en signaux intracellulaires. Après activation, TGFBR1 phosphoryle SMAD2/3 afin d’induire des programmes transcriptionnels dépendants des SMAD, et interagit également avec des voies non canoniques incluant MAPK, PI3K/AKT et la signalisation des GTPases de type Rho, modulant le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation, la régulation immunitaire et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une perturbation de la signalisation de TGFBR1 est associée à des altérations de la transition épithélio-mésenchymateuse, à des états transcriptionnels liés à la fibrose et à un dérèglement du contrôle de la croissance observé dans divers troubles du développement et en oncologie. En tant que nœud central de la signalisation TGF-β, TGFBR1 est fréquemment étudié pour cartographier l’architecture des voies selon le contexte et l’intégration des signaux au voisinage du récepteur.

TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TGFBR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TGFBR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TGFBR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TGFBR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.