Plásmido CRISPR de Activación (m) TFPI: sc-423361-ACT

El gen **Tfpi** en ratón codifica el inhibidor de la vía del factor tisular (**TFPI**), un inhibidor de serinproteasas de tipo Kunitz que restringe el inicio de la cascada de coagulación extrínseca al inhibir el complejo **TF–FVIIa** y el **factor Xa**. TFPI ayuda a mantener el equilibrio hemostático vascular y modula la señalización mediada por proteasas en la superficie endotelial, conectando la coagulación con procesos inflamatorios y de regulación de la barrera. La alteración de la expresión o la función de TFPI se asocia con fenotipos protrombóticos y disfunción vascular, y se estudia con frecuencia en el contexto de la coagulopatía asociada a sepsis, la aterosclerosis y modelos de lesión endotelial. La regulación de **Tfpi** también se cruza con vías asociadas a lípidos mediante interacciones endoteliales y la unión a lipoproteínas circulantes, lo que la hace relevante para la investigación cardiometabólica.

TFPI El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Tfpi sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TFPI El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Tfpi en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Tfpi, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TFPI. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Tfpi y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TFPI en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TFPI en células tumorales con expresión de Tfpi silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.