Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Plásmido Doble Nickase (h) TFIIH p80: sc-402231-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TFIIH p80 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TFIIH p80 (h) y el plásmido de doble nickasa TFIIH p80 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ERCC2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TFIIH p80 Anticuerpo (G-2): sc-271206
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TFIIH p80 | sc-402231-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TFIIH p80 | sc-402231-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERCC2 codifica la helicasa p80 (XPD) humana del complejo TFIIH, una helicasa de ADN 5′–3′ dependiente de ATP que constituye una subunidad esencial del complejo TFIIH. TFIIH coordina la reparación por escisión de nucleótidos al desenrollar el ADN dañado alrededor de lesiones voluminosas y también favorece el inicio de la transcripción por la ARN polimerasa II mediante la apertura del promotor. La actividad de ERCC2 conecta las vías de estabilidad genómica con la reparación acoplada a la transcripción, y los defectos en la función de TFIIH se asocian con sensibilidad a la radiación UV y con trastornos sindrómicos de reparación del ADN, como el xeroderma pigmentoso, el síndrome de Cockayne y la tricotiodestrófia.
TFIIH p80 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ERCC2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ERCC2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ERCC2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ERCC2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.