tetranectin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423429

Panoramica

Il gene murino Clec3b codifica la tetranectina, una proteina secreta di tipo lectin-like C, presente nei fluidi extracellulari e in compartimenti associati alla matrice extracellulare. La tetranectina lega il plasminogeno ed è stata collegata alla regolazione della proteolisi pericellulare, della fibrinolisi e del rimodellamento della matrice extracellulare, processi che influenzano la migrazione cellulare e la riparazione dei tessuti. Attraverso le sue interazioni con i sistemi proteasici e con i componenti della matrice, la tetranectina può modulare i microambienti infiammatori e stromali ed è stata studiata nel contesto dell’invasione tumorale, della guarigione delle ferite e del rimodellamento fibrotico. Un’alterata espressione di CLEC3B o una diversa abbondanza della proteina è stata riportata in molteplici contesti patologici, a supporto del suo utilizzo come nodo meccanicistico per indagare l’equilibrio proteolitico e la dinamica della matrice.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO tetranectin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Clec3b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Clec3b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Clec3b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina tetranectin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Clec3b per lo studio della segnalazione di tetranectin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Clec3b critici per la funzione di tetranectin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Clec3b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal tetranectin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal tetranectin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Clec3b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal tetranectin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR tetranectin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Clec3b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Clec3b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.