TET1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400845

Übersicht

TET1 (Ten-Eleven-Translocation-Methylcytosin-Dioxygenase 1) ist eine Fe(II)/2‑Oxoglutarat‑abhängige Dioxygenase, die die Oxidation von 5‑Methylcytosin zu 5‑Hydroxymethylcytosin sowie zu weiteren oxidierten Derivaten katalysiert und damit aktive DNA‑Demethylierung und epigenetisches Remodeling unterstützt. Über Interaktionen mit transkriptionellen Regulatoren und chromatinassoziierten Komplexen trägt TET1 dazu bei, Methylierungszustände an Promotoren und Enhancern zu formen, die Zellidentität, Differenzierung und Genomstabilität beeinflussen. Mit TET1 verknüpfte Veränderungen der 5hmC‑Landschaften wurden mit fehlregulierten Genexpressionsprogrammen in Krebs- und neuroentwicklungsbezogenen Kontexten in Verbindung gebracht und werden häufig zusammen mit anderer DNA‑Methylierungsmaschinerie wie DNMTs und IDH‑abhängigen Stoffwechselwegen untersucht. Als Schnittstelle zwischen epigenetischem „Writer“ und „Eraser“ wird TET1 breit eingesetzt, um die methylierungsabhängige Kontrolle von Signalnetzwerken und linien-/zelltypspezifischer Transkription zu analysieren.

Das TET1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TET1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TET1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TET1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TET1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TET1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TET1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TET1-Exone abzielen, die für die TET1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TET1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TET1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TET1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TET1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TET1 HDR-Plasmid (h) und TET1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TET1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TET1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.