Plasmide Double Nickase (h) TEM8: sc-404903-NIC

ANTXR1 (TEM8) code le récepteur 1 de la toxine du charbon, une protéine de surface cellulaire qui se lie à l’antigène protecteur et participe également à des interactions avec la matrice extracellulaire, pertinentes pour la biologie endothéliale et stromale. TEM8 a été associé à la régulation de l’adhésion et de la migration cellulaires ainsi qu’au remodelage du cytosquelette, et peut influencer des programmes d’angiogenèse et de remodelage tissulaire via une signalisation médiée par le récepteur et le trafic endocytaire. Une expression altérée d’ANTXR1 a été rapportée dans de multiples contextes de tumeurs solides et de microenvironnements associés au compartiment vasculaire, ce qui étaye son utilisation comme marqueur et nœud mécanistique pour l’étude des interactions tumeur–stroma. La biologie de TEM8 est également exploitée dans l’étude des interactions pathogène–hôte et des voies d’internalisation dépendantes des récepteurs dans les cellules humaines.

TEM8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ANTXR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ANTXR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ANTXR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ANTXR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.