Plásmido CRISPR de Activación (m) TEF-1: sc-423326-ACT

El gen Tead1 de ratón codifica el factor de transcripción TEF-1, una proteína de unión al ADN con dominio TEA/ATTS que coopera con los coactivadores YAP/TAZ para regular la actividad de potenciadores (enhancers) y programas de expresión génica que controlan la proliferación, la supervivencia y la especificación de linaje. TEF-1 es un efector central de la vía Hippo e integra señales mecánicas, el contacto célula–célula y señales de la matriz extracelular para moldear el crecimiento tisular y el tamaño de los órganos. Durante el desarrollo y la homeostasis en el adulto, TEF-1 influye en redes génicas de cardiomiocitos y músculo esquelético, así como en la regeneración epitelial y en los estados de células madre/progenitoras. La transcripción dependiente de TEAD, cuando está desregulada, se estudia con frecuencia en contextos de control anómalo del crecimiento y de programas transcripcionales fibróticos u oncogénicos, lo que convierte a Tead1 en un nodo útil para interrogar la vía en modelos murinos.

TEF-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Tead1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TEF-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Tead1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Tead1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TEF-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Tead1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TEF-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TEF-1 en células tumorales con expresión de Tead1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.