TdT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423324

Übersicht

Die DNA-Nukleotidylexotransferase (Dntt) kodiert die terminale Desoxynukleotidyltransferase (TdT), eine vorlagenunabhängige DNA-Polymerase, die an V(D)J-Rekombinationsverknüpfungsstellen nicht vorlagengebundene Nukleotide anfügt und dadurch die N‑Region‑Diversität erzeugt. TdT ist in sich entwickelnden Lymphozyten während der Assemblierung von Antigenrezeptorgenen aktiv und beeinflusst die Breite des Repertoires durch die Modulation von Endverknüpfungsergebnissen und der Prozessierung der Verknüpfungsstellen. Ihre Aktivität überschneidet sich mit der Reparatur von DNA‑Doppelstrangbrüchen und mit Faktoren des nicht‑homologen End‑Joinings (NHEJ), die Rekombinationsintermediate auflösen. Eine fehlregulierte Dntt-Expression oder eine aberrante TdT-Aktivität wird широко als molekulares Merkmal unreifer lymphoider Zustände genutzt und ist relevant für mechanistische Studien zur lymphoiden Entwicklung und zur Genomintegrität während der Rekombination.

Das TdT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dntt-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dntt-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dntt nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TdT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dntt-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TdT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Dntt-Exone abzielen, die für die TdT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dntt-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TdT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TdT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dntt-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TdT HDR-Plasmid (m) und TdT HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dntt-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dntt-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.