Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TdT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423324
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TdT CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（m）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してTdTゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TdT 抗体 (C-11): sc-393710
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TdT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m) | sc-423324 | 20 µg | $397.00 |
概要
DNA nucleotidylexotransferase（Dntt）は、終末デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（TdT）をコードする。TdTは鋳型非依存性のDNAポリメラーゼであり、V(D)J再構成の接合部に鋳型に依存しないヌクレオチドを付加してN領域多様性を生み出す。TdTは抗原受容体遺伝子の組み立てが進む発生過程のリンパ球で機能し、末端結合の結果や接合部処理を調節することでレパートリーの広がりに影響する。その活性は、再構成中間体を解決するDNA二本鎖切断修復および非相同末端結合（NHEJ）因子と交差する。Dntt発現の制御異常やTdT活性の異常は、未成熟リンパ系状態の分子学的特徴として広く利用されており、リンパ球発生や再構成時のゲノム完全性の機構研究に関連する。
TdT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDntt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dntt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dnttのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TdTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、TdTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dntt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- TdTの機能に不可欠なDnttエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、Dnttゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- TdT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTdT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dntt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
TdT HDRプラスミド（m）および TdT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDnttホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDntt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。