TCTE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423315

Übersicht

Tcte1 kodiert TCTE1, ein mit Zilien und Flagellen assoziiertes Protein, das an der strukturellen Integrität und Motilität des Axonems beteiligt ist. In der Maus wird TCTE1 mit Prozessen in Verbindung gebracht, die die Organisation der Mikrotubuli im zilienassoziierten Kompartiment steuern und so ein koordiniertes, dyneinvermitteltes Schlagen sowie einen effizienten intraflagellären Transport unterstützen. Störungen von Axonem-Komponenten können die Ziliogenese und die Funktion der Spermienflagelle beeinträchtigen und liefern damit mechanistische Zusammenhänge zu Phänotypen männlicher Infertilität sowie zu übergeordneten, ciliopathieassoziierten Signalwegen. Als Bestandteil eines ziliären Moduls ist TCTE1 relevant для die Untersuchung, wie die Axonem-Architektur mit zellulären Signalprogrammen zusammenspielt, die auf intakte primäre und motile Zilien angewiesen sind.

Das TCTE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tcte1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tcte1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tcte1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TCTE1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tcte1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TCTE1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tcte1-Exone abzielen, die für die TCTE1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tcte1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TCTE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TCTE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tcte1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TCTE1 HDR-Plasmid (m) und TCTE1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tcte1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tcte1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.