TCF-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400821

概要

TCF7L1は転写因子TCF-3をコードしており、TCF-3は高移動度群（HMG）に属するDNA結合タンパク質で、カノニカルなWnt/β-カテニンシグナル伝達の下流で文脈依存的に遺伝子発現を制御します。TCF-3はβ-カテニンまたは転写コリプレッサーと複合体を形成することで、細胞運命の決定、増殖、系譜特異化プログラム（幹細胞・前駆細胞の維持を含む）の制御に寄与します。TCF7L1の活性は発生および分化経路と交差し、Wnt応答性エンハンサーにおけるクロマチン状態の制御にも関与します。TCF7L1/TCF-3シグナルの破綻は、がんに関連するWnt経路の攪乱を含む疾患関連の細胞モデルにおいて、分化状態の変化や増殖表現型との関連で研究されています。

TCF-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTCF7L1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TCF7L1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TCF7L1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TCF-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TCF-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TCF7L1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TCF-3の機能に不可欠なTCF7L1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TCF7L1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TCF-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTCF-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TCF7L1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TCF-3 HDRプラスミド（h）および TCF-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTCF7L1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTCF7L1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。