TCF-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400821

Panoramica

TCF7L1 codifica il fattore di trascrizione TCF-3, una proteina legante il DNA del gruppo ad alta mobilità (HMG) che agisce come regolatore dell’espressione genica dipendente dal contesto a valle della segnalazione canonica Wnt/β-catenina. Interagendo con la β-catenina o con corepressori trascrizionali, TCF-3 contribuisce a controllare le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e i programmi di specificazione di linea, inclusi il mantenimento delle cellule staminali e progenitrici. L’attività di TCF7L1 si integra con vie di sviluppo e differenziamento e contribuisce alla regolazione dello stato della cromatina a livello di enhancer responsivi a Wnt. La deregolazione della segnalazione TCF7L1/TCF-3 è stata studiata in relazione a stati di differenziamento alterati e fenotipi proliferativi in modelli cellulari rilevanti per la malattia, incluse le perturbazioni della via Wnt associate al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TCF-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TCF7L1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TCF7L1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TCF7L1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TCF-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TCF7L1 per lo studio della segnalazione di TCF-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TCF7L1 critici per la funzione di TCF-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TCF7L1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TCF-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TCF-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TCF7L1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TCF-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TCF-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TCF7L1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TCF7L1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.