TCEA3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408517-ACT

TCEA3 kodiert den Transkriptions-Elongationsfaktor A3, ein Protein der TFIIS-Familie, das mit der RNA-Polymerase II assoziiert, um die Spaltung des Transkripts zu stimulieren und zurückgerutschte Elongationskomplexe zu reaktivieren, wodurch eine produktive mRNA-Synthese unterstützt wird. Durch die Modulation von Elongationstreue und Wiederanlaufen trägt TCEA3 zur globalen transkriptionellen Homöostase bei und beeinflusst zelluläre Programme, die mit Proliferation, Differenzierung und Stressantworten verknüpft sind. Eine Fehlregulation der Kontrolle der Pol-II-Elongation und der TFIIS-Aktivität wurde mit Defekten der Genomstabilität und veränderten Transkriptionszuständen in mehreren Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, darunter Krebs und Entwicklungsstörungen. Als transkriptioneller Regulator ist TCEA3 ein nützliches Ziel, um zu untersuchen, wie Elongationsfaktoren Genexpressionsnetzwerke und Signalweg-Outputs in humanen Zellen feinabstimmen.

TCEA3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TCEA3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TCEA3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TCEA3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TCEA3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TCEA3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TCEA3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TCEA3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TCEA3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TCEA3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.