TBC1D15 Double Nickase Plasmid (h): sc-413036-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TBC1D15 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TBC1D15 Double-Nickase-Plasmid (h) und TBC1D15 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TBC1D15 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TBC1D15 Double Nickase Plasmid (h) | sc-413036-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TBC1D15 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-413036-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TBC1D15 kodiert ein Rab-GTPase-aktivierendes Protein (RabGAP), das an der Kontrolle des Membranverkehrs und der Organellendynamik beteiligt ist, mit besonders wichtigen Funktionen an Kontaktstellen zwischen Mitochondrien und endoplasmatischem Retikulum. Durch die Modulation des Rab-abhängigen vesikulären Transports und die Kopplung von Transportprozessen an die mitochondriale Morphologie trägt TBC1D15 zu Vorgängen wie mitochondrialer Spaltung (Fission), Mitophagie und zellulärer metabolischer Anpassung bei. Eine veränderte Regulation dieser Wege ist für Stressantworten und proliferative Programme relevant, wodurch TBC1D15 ein nützliches Ziel ist, um zu untersuchen, wie die Qualitätskontrolle von Organellen mit Signalübertragung und Bioenergetik zusammenwirkt. In der biomedizinischen Forschung unterstützt die gezielte Beeinflussung von TBC1D15 mechanistische Studien zur mitochondrialen Homöostase, zum intrazellulären Transport und zu damit verbundenen Phänotypen in Modellen für Krebs und Neurodegeneration.
TBC1D15 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TBC1D15-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TBC1D15 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TBC1D15-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TBC1D15-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.