Plasmide Double Nickase (h) TARDBP: sc-401890-NIC

TARDBP (TDP-43) est une protéine de liaison à l’ARN/ADN exprimée de manière ubiquitaire, qui régule plusieurs niveaux du métabolisme de l’ARN, notamment l’épissage des pré-ARNm, la stabilité des transcrits et leur transport, et participe également à la régulation transcriptionnelle. Elle se localise principalement dans le noyau, mais peut faire des navettes vers le cytoplasme et être recrutée dans les granules de stress lors d’un stress cellulaire, ce qui la relie à la protéostasie et aux processus de contrôle qualité de l’ARN. Le traitement de l’ARN dépendant de TARDBP contribue au maintien de l’homéostasie neuronale en modulant des programmes d’épissage et en empêchant l’inclusion aberrante d’exons cryptiques au sein de longs transcrits neuronaux. La dérégulation, la mauvaise localisation et l’agrégation de TDP-43 sont fortement associées aux mécanismes des maladies neurodégénératives, notamment la SLA et la dégénérescence lobaire fronto-temporale, et sont également étudiées dans des contextes plus larges de dysfonctionnement des protéines liant l’ARN.

TARDBP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TARDBP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TARDBP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TARDBP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TARDBP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.