TARDBP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401890-ACT

TARDBP codifica TDP-43, una proteina legante RNA/DNA che regola lo splicing del pre‑mRNA, la stabilità dell’mRNA e il suo trasporto, con ruoli di primo piano nel metabolismo dell’RNA neuronale e nella dinamica dei granuli di stress. Legandosi a motivi di RNA ricchi in UG, TDP-43 modula programmi di splicing alternativo e mantiene l’integrità del trascrittoma, collegandosi così a vie che controllano la proteostasi, il trasporto nucleo‑citoplasmatico e le risposte cellulari allo stress. La disregolazione della localizzazione di TDP-43 e la sua aggregazione sono un segno distintivo di molteplici patologie neurodegenerative, e alterazioni dello splicing dipendente da TARDBP sono state implicate in reti geniche rilevanti per la malattia. Di conseguenza, TARDBP è ampiamente studiato nei modelli cellulari umani per i meccanismi di processamento dell’RNA, neurotossicità e controllo dell’espressione genica.

TARDBP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TARDBP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TARDBP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TARDBP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TARDBP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TARDBP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TARDBP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TARDBP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TARDBP nelle cellule tumorali con espressione di TARDBP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.