Plasmide CRISPR d'Activation (h) TARDBP: sc-401890-ACT

TARDBP code pour TDP‑43, une protéine de liaison à l’ARN/ADN qui régule l’épissage des pré‑ARNm, la stabilité des ARNm et leur transport, avec des rôles majeurs dans le métabolisme neuronal de l’ARN et la dynamique des granules de stress. En se liant à des motifs d’ARN riches en UG, TDP‑43 module des programmes d’épissage alternatif et maintient l’intégrité du transcriptome, ce qui la relie à des voies contrôlant la protéostasie, le transport nucléocytoplasmique et les réponses au stress cellulaire. La dérégulation de la localisation de TDP‑43 et son agrégation constituent une caractéristique de plusieurs troubles neurodégénératifs, et des altérations de l’épissage dépendant de TARDBP ont été impliquées dans des réseaux de gènes pertinents pour la maladie. Par conséquent, TARDBP est largement étudié pour élucider les mécanismes du traitement de l’ARN, de la neurotoxicité et du contrôle de l’expression génique dans des modèles cellulaires humains.

TARDBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TARDBP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TARDBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TARDBP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TARDBP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TARDBP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TARDBP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TARDBP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TARDBP dans les cellules tumorales présentant une expression de TARDBP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.