Plasmide CRISPR d'Activation (h) T2-cadherin: sc-401926-ACT

CDH10 code la T2‑cadhérine, une molécule d’adhésion cellule‑cellule dépendante du calcium de la superfamille des cadhérines, qui contribue à l’architecture tissulaire en soutenant des interactions homophiles à la membrane plasmique. En reliant les complexes d’adhésion au remodelage du cytosquelette d’actine, la T2‑cadhérine influence la signalisation dépendante du contact, la polarité cellulaire et des programmes de migration coordonnée. L’expression de CDH10 est marquée dans les contextes neuronal et épithélial, ce qui l’associe à des voies qui façonnent la croissance des neurites et la connectivité synaptique, ainsi qu’à l’organisation épithéliale. Une adhésion médiée par les cadhérines dérégulée, notamment via une activité altérée de CDH10, est fréquemment étudiée dans les travaux sur les anomalies du développement et la biologie tumorale, où les modifications de l’adhésion cellulaire et de l’invasivité constituent des phénotypes clés.

T2-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

T2-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de T2-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de T2-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie T2-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.