T1R2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402555

Descripción general

TAS1R2 codifica la subunidad del receptor del sabor dulce T1R2, un GPCR de clase C que forma un heterodímero con T1R3 para detectar azúcares y edulcorantes y acoplar la unión del ligando a la señalización intracelular de segundos mensajeros. Más allá de las células gustativas, se ha descrito la señalización T1R2/T1R3 en contextos enteroendocrinos y en otros sistemas quimiosensoriales, donde puede influir en la detección de nutrientes y en respuestas hormonales o metabólicas posteriores. La activación del receptor suele vincularse a vías mediadas por GPCR que implican proteínas G, PLCβ2, movilización de Ca²⁺ intracelular y programas posteriores de MAPK o de transcripción, dependiendo del tipo celular. La expresión alterada de TAS1R2 o sus variantes se han investigado en relación con fenotipos metabólicos, conducta alimentaria y homeostasis de la glucosa, lo que respalda su relevancia para estudios de redes de señalización sensibles a nutrientes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO T1R2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TAS1R2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TAS1R2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TAS1R2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína T1R2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TAS1R2 para la investigación de la señalización de T1R2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TAS1R2 críticos para la función de T1R2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TAS1R2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido T1R2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido T1R2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TAS1R2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR T1R2 (h) y el plásmido HDR T1R2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TAS1R2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TAS1R2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.