Partículas Lentivirales de Activación (h) T-type Ca⁺⁺ CP α1G: sc-418331-LAC

CACNA1G codifica el canal de calcio tipo T humano α1G (Cav3.1), un canal activado a bajo voltaje que permite un influjo transitorio de Ca²⁺ cerca de los potenciales de membrana en reposo. Al modular la excitabilidad de la membrana, la descarga en rebote y el disparo oscilatorio, Cav3.1 influye en la electrofisiología neuronal y cardíaca y acopla la actividad eléctrica a la señalización dependiente de calcio, incluidas vías reguladas por calmodulina y programas transcripcionales posteriores. La alteración de la actividad de CACNA1G se ha asociado con trastornos que implican anomalías de la ritmicidad y la excitabilidad, como la susceptibilidad a convulsiones y fenotipos de conducción cardíaca, y con frecuencia se estudia en contextos de desregulación de la señalización del calcio. Como canal iónico de membrana, CACNA1G también proporciona un vínculo mecanístico entre la entrada de Ca²⁺ dependiente del estímulo y procesos celulares como la liberación de neurotransmisores, la generación de marcapasos y la expresión génica dependiente de la actividad.

Las partículas de activación lentiviral T-type Ca++ CP α1G (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CACNA1G en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral T-type Ca++ CP α1G (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CACNA1G, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de T-type Ca++ CP α1G. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CACNA1G y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.