Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SYT Double Nickase Plasmid (h): sc-401575-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SYT Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SYT Double-Nickase-Plasmid (h) und SYT Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SS18 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SYT: sc-390615
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SYT Double Nickase Plasmid (h) | sc-401575-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SYT Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401575-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SS18 (SYT) kodiert eine zentrale Untereinheit des ATP-abhängigen Chromatin-Remodelling-Komplexes SWI/SNF (BAF), der die Zugänglichkeit des Chromatins und die RNA-Polymerase-II-abhängige Transkription reguliert. Durch die Koordination der Kommunikation zwischen Enhancer und Promotor sowie linienspezifischer Genexpressionsprogramme trägt SS18 zur Kontrolle des Zellzyklus, der Differenzierung und der Entwicklungsmusterbildung bei. Eine abnorme SS18-Biologie ist stark mit dem Synovialsarkom verknüpft, bei dem durch Translokationen entstandene SS18-Fusionsproteine die Zusammensetzung des BAF-Komplexes und dessen Transkriptionsausgänge neu verdrahten. SS18-assoziierte Chromatinfehlregulation liefert zudem wichtige Erkenntnisse für weiter gefasste Studien zur epigenetischen Kontrolle, zu onkogenen transkriptionellen Abhängigkeiten und zur Genomorganisation in menschlichen Zellen.
SYT Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SS18-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SS18 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SS18-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SS18-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.