Synip CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423213

Übersicht

Stxbp4 kodiert das Synaptotagmin-bindende Protein 4 (Synip), ein mit Syntaxin interagierendes Protein, das an der regulierten Vesikeltrafficking und Membranfusion beteiligt ist. Synip wurde mit der insulininduzierten Translokation von GLUT4-Vesikeln in Verbindung gebracht und unterstützt die Glukoseaufnahme, indem es SNARE-abhängige Andock- und Fusionsereignisse an der Plasmamembran koordiniert. Über seine Interaktionen mit der zentralen exozytotischen Maschinerie trägt Synip zu reizgekoppelter Sekretion und zu endomembranären Dynamiken bei, die mit metabolischen Signalwegen verknüpft sind. Eine veränderte Synip-Funktion wurde mit einer beeinträchtigten Insulinantwort und umfassenderen Defekten in Vesikeltransportprozessen assoziiert, die für die Forschung zu metabolischen Erkrankungen relevant sind.

Das Synip CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Stxbp4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Stxbp4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Stxbp4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Synip-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Stxbp4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Synip-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Stxbp4-Exone abzielen, die für die Synip-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Stxbp4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Synip CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Synip CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Stxbp4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Synip HDR-Plasmid (m) und Synip HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Stxbp4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Stxbp4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.