Plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptotagmin IV (m): sc-423246

Présentation

Syt4 code la synaptotagmine IV, un membre atypique de la famille des synaptotagmines impliqué dans la régulation dépendante de l’activité du trafic vésiculaire et de l’exocytose dans les neurones et les cellules neuroendocrines. Contrairement aux capteurs canoniques du Ca2+, la synaptotagmine IV module le cycle des vésicules synaptiques, la probabilité de libération des neurotransmetteurs et la plasticité présynaptique, reliant la dynamique membranaire aux programmes d’activité neuronale. La fonction de Syt4 croise la machinerie de fusion médiée par les SNARE, le recyclage membranaire endo-/exocytique et les voies de signalisation dépendantes du calcium qui façonnent l’adaptation à l’échelle des circuits. Une expression ou une fonction dérégulée de SYT4 a été associée à des phénotypes de plasticité synaptique altérés et est étudiée dans le cadre de mécanismes pertinents pour les maladies neurodéveloppementales et neuropsychiatriques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptotagmin IV (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Syt4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Syt4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Syt4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Synaptotagmin IV.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Syt4 pour l'étude de la signalisation de Synaptotagmin IV, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Syt4 essentiels à la fonction de Synaptotagmin IV
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Syt4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Synaptotagmin IV plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Synaptotagmin IV plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Syt4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Synaptotagmin IV plasmide HDR (m) et le Synaptotagmin IV (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Syt4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Syt4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.