Plasmide CRISPR d'Activation (h) SVCT1: sc-403006-ACT

SLC23A1 code le transporteur humain de la vitamine C 1 dépendant du sodium (SVCT1), un symporteur de la membrane plasmique qui assure une capture à haute capacité de la L‑ascorbate, couplée aux gradients de sodium. L’activité de SVCT1 contribue à l’homéostasie redox cellulaire en maintenant des réserves intracellulaires d’ascorbate, qui influencent la défense antioxydante, l’hydroxylation du collagène et la régulation épigénétique dépendante de dioxygénases. Dans les tissus épithéliaux tels que l’intestin et le rein, SVCT1 participe à l’absorption alimentaire et à la réabsorption rénale de la vitamine C, modulant ainsi la disponibilité systémique en ascorbate. Des altérations de la fonction ou de l’expression de SLC23A1 ont été étudiées dans des contextes de susceptibilité au stress oxydant ainsi que dans des phénotypes métaboliques et inflammatoires, où le transport de la vitamine C peut moduler les voies de signalisation de la réponse au stress.

SVCT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC23A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SVCT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC23A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC23A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SVCT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC23A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SVCT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SVCT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC23A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.