Plasmide CRISPR/Cas9 KO SUV420H2 (h): sc-404626

Présentation

KMT5C code la méthyltransférase des lysines SUV420H2, une enzyme modifiant la chromatine qui catalyse la triméthylation de la lysine 20 de l’histone H4 (H4K20me3). Cette marque est enrichie dans l’hétérochromatine et favorise la compaction de la chromatine à un niveau supérieur, le contrôle du timing de réplication et le maintien de la stabilité du génome via la régulation du choix des voies de réparation de l’ADN. L’activité de SUV420H2 s’inscrit dans des programmes de silençage épigénétique et de remodelage de la chromatine liés au cycle cellulaire, influençant la répression transcriptionnelle au niveau des éléments répétitifs et de loci spécifiques de lignée. La dérégulation des profils de méthylation de H4K20 et l’altération de l’expression de SUV420H2 ont été associées à des états de chromatine aberrants observés dans le cancer et d’autres contextes d’instabilité génomique, ce qui fait de KMT5C un nœud pertinent pour des études mécanistiques centrées sur l’épigénétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SUV420H2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KMT5C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KMT5C, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KMT5C à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SUV420H2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KMT5C pour l'étude de la signalisation de SUV420H2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KMT5C essentiels à la fonction de SUV420H2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KMT5C pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SUV420H2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SUV420H2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KMT5C. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SUV420H2 plasmide HDR (h) et le SUV420H2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KMT5C pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KMT5C définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.