Plásmido Doble Nickase (h) Sur-8: sc-409478-NIC

SHOC2 codifica Sur-8, una proteína de andamiaje con repeticiones ricas en leucina que facilita la activación de RAF1 dependiente de RAS y amplifica la señalización MAPK/ERK aguas abajo de los receptores tirosina quinasa. Al promover el ensamblaje de complejos de señalización RAS–RAF, Sur-8 influye en la proliferación, la diferenciación y la regulación por retroalimentación dentro de la cascada ERK, con conexiones adicionales con la señalización asociada a EGFR y a integrinas. La alteración de la función de SHOC2 se ha implicado en síndromes del desarrollo como el trastorno tipo Noonan con cabello anágeno laxo y se ha estudiado por su contribución a programas desregulados de señalización MAPK relevantes en contextos de RAS oncogénico. Por lo tanto, SHOC2 es un nodo útil para analizar la dinámica de la vía, la propagación de señales dependiente de andamios y las relaciones genotipo–fenotipo en células humanas.

Sur-8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SHOC2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SHOC2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SHOC2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SHOC2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.