Plásmido CRISPR de Activación (h) SUR-2: sc-401399-ACT

ABCC9 codifica el receptor de sulfonilurea 2 (SUR-2), una subunidad reguladora de los canales de potasio sensibles al ATP (KATP) que acopla el estado energético celular con la excitabilidad de la membrana. Al ensamblarse con subunidades de canales de potasio rectificadores hacia el interior para formar complejos KATP funcionales, SUR-2 ayuda a ajustar la conductancia de potasio en respuesta a nucleótidos y ligandos farmacológicos, influyendo en el tono del músculo liso vascular y en la actividad eléctrica cardíaca. Este eje de señalización integra la detección metabólica con la homeostasis iónica y la respuesta al estrés, y afecta procesos como la vasodilatación, la dinámica del potencial de acción y la protección durante desafíos energéticos. La variación genética o la desregulación de ABCC9 se ha asociado con fenotipos cardiovasculares y sistémicos relacionados con la excitabilidad y la perfusión tisular, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la regulación de canales y de la biología cardiometabólica.

SUR-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABCC9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SUR-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABCC9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABCC9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SUR-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABCC9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SUR-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SUR-2 en células tumorales con expresión de ABCC9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.