Plásmido CRISPR de Activación (m) Superoxide Dismutase 1/SOD1: sc-423069-ACT

El gen **Sod1** de ratón codifica la superóxido dismutasa 1 (SOD1), una metaloenzima de Cu/Zn predominantemente citosólica que cataliza la dismutación del anión superóxido en peróxido de hidrógeno y oxígeno, limitando así el daño oxidativo a proteínas, lípidos y ácidos nucleicos. Al modular la homeostasis redox celular, SOD1 influye en la función mitocondrial, en el equilibrio de la red antioxidante (p. ej., el manejo de peróxidos dependiente de peroxirredoxina y catalasa) y en vías de señalización sensibles al estrés, incluidas MAPK y NF-κB. La alteración de la actividad de SOD1 modifica el flujo de especies reactivas de oxígeno y puede afectar la proteostasis, la neuroinflamación y la supervivencia celular bajo estrés oxidativo. La biología de SOD1 se estudia ampliamente en el contexto de la desregulación redox y en modelos de neurodegeneración, así como en fenotipos más amplios asociados al estrés oxidativo en el metabolismo y el envejecimiento.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sod1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sod1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sod1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Superoxide Dismutase 1/SOD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sod1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Superoxide Dismutase 1/SOD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Superoxide Dismutase 1/SOD1 en células tumorales con expresión de Sod1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.