SUN2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404746

Übersicht

SUN2 kodiert ein SUN-Domänen-haltiges Protein der inneren Kernmembran, das eine zentrale Komponente des LINC‑Komplexes (Linker of Nucleoskeleton and Cytoskeleton) ist. Durch die Bindung an Kernlamine und die Interaktion mit KASH‑Domänen‑Proteinen über den perinukleären Raum hinweg koppelt SUN2 den Zellkern an das Aktinzytoskelett und reguliert so die Positionierung des Zellkerns, die Mechanotransduktion und die Übertragung zytoskelettärer Kräfte. SUN2 trägt zur Integrität der Kernhülle, zur Chromatinorganisation und zu DNA‑Schadensantworten bei, die von einer korrekten Kopplung zwischen Zellkern und Zytoskelett abhängen. Eine Fehlregulation von Komponenten des LINC‑Komplexes, einschließlich SUN2, wurde mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Laminopathien, Kardiomyopathie, Muskelerkrankungen und krebsassoziierte Veränderungen der Kernarchitektur relevant sind.

Das SUN2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SUN2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SUN2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SUN2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SUN2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SUN2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SUN2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SUN2-Exone abzielen, die für die SUN2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SUN2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SUN2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SUN2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SUN2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SUN2 HDR-Plasmid (h) und SUN2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SUN2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SUN2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.