SUMO-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400788-ACT

Il gene umano **SUMO3** codifica **SUMO-3**, un modificatore di tipo ubiquitina che viene coniugato covalentemente alle proteine bersaglio per regolarne la localizzazione, la stabilità e le reti di interazione. La SUMOilazione influenza processi nucleari fondamentali, tra cui la segnalazione e la riparazione del danno al DNA, l’organizzazione della cromatina, la regolazione della trascrizione, il processamento dell’RNA e la progressione del ciclo cellulare, e si interseca con le vie di risposta allo stress attraverso la modifica dinamica e reversibile di proteine regolatorie chiave. SUMO-3 è particolarmente coinvolto nella formazione di catene poli-SUMO e può promuovere la degradazione dei substrati modificati dipendente dalle ubiquitina-ligasi mirate a SUMO (STUbL), collegando la SUMOilazione alla proteostasi. Una disregolazione dell’espressione di **SUMO3** o dell’attività della via SUMO è stata associata ad alterazioni dei programmi di mantenimento del genoma e di trascrizione osservate nel cancro e nelle neurodegenerazioni, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della segnalazione nucleare.

SUMO-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SUMO3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SUMO-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SUMO3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SUMO3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SUMO-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SUMO3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SUMO-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SUMO-3 nelle cellule tumorali con espressione di SUMO3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.