Plasmide Double Nickase (m2) Sulf-2: sc-428206-NIC-2

Chez la souris, Sulf2 code l’endosulfatase extracellulaire de l’héparane sulfate 6‑O n°2 (Sulf‑2), une enzyme sécrétée qui remodèle l’héparane sulfate à la surface des cellules et dans la matrice en retirant des groupements sulfate en 6‑O, modulant ainsi la disponibilité des ligands et les interactions avec les récepteurs. En modifiant les profils de sulfatation de l’héparane sulfate, Sulf‑2 influence des axes de signalisation majeurs, notamment FGF, WNT, Hedgehog, BMP et les gradients de chimiokines, et façonne des processus tels que la migration cellulaire, la mise en place des patrons tissulaires, l’angiogenèse et les réponses inflammatoires. Une activité SULF2 dérégulée a été associée à des altérations de la dynamique de la matrice extracellulaire et à une signalisation aberrante dans des contextes tels que la biologie tumorale, la fibrose et des phénotypes neurodéveloppementaux, faisant de Sulf2 une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation dépendante des glycosaminoglycanes. L’édition génique de Sulf2 dans des modèles murins permet une dissection fonctionnelle de l’ajustement des voies dépendant de la sulfatation, de la régulation de la niche extracellulaire et des interactions microenvironnementales pertinentes pour la maladie, in vitro comme in vivo.

Sulf-2 Le plasmide double nickase (m2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sulf2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sulf2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sulf2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sulf2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.