Plasmide Double Nickase (h) Sulf-2: sc-403277-NIC

SULF2 code pour Sulf-2, une endosulfatase extracellulaire 6‑O qui remodèle les protéoglycanes à héparane sulfate en retirant de manière sélective des groupements 6‑O‑sulfate. En reconfigurant les profils de sulfatation de l’héparane sulfate, Sulf‑2 module la disponibilité des ligands et l’engagement des récepteurs dans des voies de signalisation clés, notamment FGF, Wnt, BMP et Hedgehog, influençant la prolifération cellulaire, la migration et le remodelage tissulaire. Une expression ou une activité altérée de SULF2 a été associée à une dérégulation de la signalisation de la matrice extracellulaire et a été étudiée dans le contexte de la biologie tumorale, de la fibrose et des processus inflammatoires. Ces fonctions font de SULF2 une cible utile pour analyser comment l’édition de l’héparane sulfate contrôle les gradients de facteurs de croissance et les programmes transcriptionnels en aval.

Sulf-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SULF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SULF2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SULF2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SULF2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.