Sulf-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403277

Übersicht

SULF2 kodiert Sulf-2, eine extrazelluläre Endosulfatase, die selektiv 6‑O‑Sulfatgruppen von Heparansulfat-Proteoglykanen entfernt und damit den Sulfatierungscode neu gestaltet, der die Verfügbarkeit von Liganden und die Rezeptorbindung steuert. Durch die Bearbeitung von Heparansulfat an der Zelloberfläche und in der perizellulären Matrix moduliert Sulf-2 die Signaloutputs von Signalwegen wie FGF, WNT und VEGF und beeinflusst dadurch Zellproliferation, Migration, Differenzierung und Adhäsion. Eine veränderte SULF2-Expression und das Remodeling von Heparansulfat wurden mit der Regulation der Tumormikroumgebung, invasivem Verhalten und angiogenen Antworten in Verbindung gebracht und sind auch für fibrotische und entzündliche Prozesse relevant. Diese Funktionen machen SULF2 zu einem nützlichen Ziel, um extrazellulärmatrixabhängige Signalübertragung und die glycosaminoglykanvermittelte Regulation der Zellkommunikation zu untersuchen.

Das Sulf-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SULF2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SULF2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SULF2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sulf-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SULF2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sulf-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SULF2-Exone abzielen, die für die Sulf-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SULF2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Sulf-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Sulf-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SULF2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sulf-2 HDR-Plasmid (h) und Sulf-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SULF2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SULF2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.