SUGT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405128

Panoramica

SUGT1 (suppressore dell’allele G2 dell’omologo di SKP1) è un co-chaperone conservato che interagisce con HSP90 e partecipa all’assemblaggio e alla stabilità di complessi multiproteici centrali per la progressione del ciclo cellulare. È stato implicato nella funzione del cinetocore e nel controllo del checkpoint mitotico, supportando una corretta segregazione dei cromosomi e la proliferazione. SUGT1 contribuisce anche alla segnalazione dell’immunità innata modulando le vie dipendenti da NOD1/NOD2 e le risposte infiammatorie a valle tramite la formazione regolata di complessi proteici. Un’espressione o una funzione deregolata di SUGT1 è stata associata, in sistemi modello umani, ad alterazioni della proteostasi, difetti del ciclo cellulare e fenotipi infiammatori rilevanti per la biologia del cancro e per disturbi correlati al sistema immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SUGT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SUGT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SUGT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SUGT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SUGT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SUGT1 per lo studio della segnalazione di SUGT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SUGT1 critici per la funzione di SUGT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SUGT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SUGT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SUGT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SUGT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SUGT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SUGT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SUGT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SUGT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.