Stim1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401311-LAC

STIM1 umano codifica la stromal interaction molecule 1 (Stim1), un sensore del Ca²⁺ del reticolo endoplasmatico che rileva la deplezione di Ca²⁺ nel lume e si accoppia ai canali ORAI per innescare l’ingresso di calcio operato da riserva (SOCE). Questo asse di segnalazione modella la dinamica del Ca²⁺ citosolico che controlla la trascrizione dipendente da NFAT, la progressione del ciclo cellulare, l’adattamento metabolico e il rimodellamento del citoscheletro. Il SOCE dipendente da Stim1 è centrale nell’attivazione delle cellule immunitarie e in processi più ampi regolati dal calcio, e un’alterata attività di STIM1 è stata collegata a disfunzioni immunitarie e ad altre patologie che coinvolgono una segnalazione del calcio aberrante. In quanto regolatore prossimale dell’afflusso di Ca²⁺, STIM1 offre un punto d’ingresso meccanicistico per analizzare le vie calcio-dipendenti e le risposte allo stress nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Stim1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di STIM1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Stim1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione STIM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Stim1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo STIM1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.