stefin A2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423187

Descripción general

Stfa2 codifica la proteína murina de la familia de las cistatinas estefina A2, un inhibidor citosólico de proteasas de cisteína tipo papaína, como las catepsinas. Al limitar la actividad proteasa, la estefina A2 contribuye a la regulación de la proteólisis intracelular, el recambio proteico lisosomal y endolisosomal, y la protección frente al daño mediado por proteasas durante el estrés y la inflamación. El equilibrio alterado entre las proteasas de cisteína y sus inhibidores es relevante para vías que controlan el procesamiento de antígenos, el mantenimiento de la barrera epitelial y la remodelación tisular. La desregulación de este eje proteasa–inhibidor se ha asociado con fenotipos inflamatorios y procesos relacionados con el cáncer, en los que la actividad de las catepsinas influye en la invasión y la remodelación del microambiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO stefin A2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Stfa2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Stfa2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Stfa2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína stefin A2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Stfa2 para la investigación de la señalización de stefin A2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Stfa2 críticos para la función de stefin A2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Stfa2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido stefin A2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido stefin A2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Stfa2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR stefin A2 (m) y el plásmido HDR stefin A2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Stfa2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Stfa2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.