Plasmide Double Nickase (m) Stat5b: sc-423179-NIC

La STAT5B murine (signal transducer and activator of transcription 5B) est un facteur de transcription sensible aux cytokines qui relie les kinases JAK associées aux récepteurs à des changements rapides de l’expression génique. Après phosphorylation, STAT5B dimérise et se transloque vers le noyau afin de réguler des programmes contrôlant le développement des lymphocytes, la différenciation myéloïde, le métabolisme et la signalisation des facteurs de croissance, avec des rôles importants en aval des cytokines de la famille de l’IL-2 et de l’hormone de croissance. L’activité de Stat5b s’inscrit dans les boucles de rétrocontrôle de la voie JAK–STAT, le remodelage de la chromatine et la régulation transcriptionnelle de gènes de survie et du cycle cellulaire. Une signalisation STAT5B dérégulée est fréquemment étudiée dans des modèles de déséquilibre immunitaire, d’inflammation et de transformation hématopoïétique, où des sorties transcriptionnelles modifiées peuvent orienter le destin des lignages et la capacité proliférative.

Stat5b Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Stat5b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Stat5b. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Stat5b. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Stat5b.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.